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各种氨基酸含量 食品中氨基酸含量测试
食品中对氨基酸的测定
食品中氨基酸的测定,是指在食品中对氨基酸的测定。
食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸,经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后,与茚三酮溶液产生颜色反应,再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。一份水解液可同时测定天冬,苏,丝,谷,脯,甘,丙,缬,蛋,异亮,亮,酪,苯丙,组,赖和精氨酸等16种氨基酸,其低检出限为10pmol。
1. 分光光度法氨基酸:主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应,产生蓝紫色化合物,该化合物在某一波长处有大吸收峰,根据吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生剂为茚三酮。分光光度法具有操作方便、仪器要求简单、成本低、应用范围广以及适用于芳香族氨基酸等特点。
2. 毛细管电泳法氨基酸:根据分离原理的不同,可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。其中,毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸。毛细管电泳法具有分离效率高、分析时间短、溶剂用量少、无须梯度洗脱以及适用于氨基酸的手性分离等特点,但该方法分析结果重现性较差。
3. 近红外光谱法氨基酸:利用**化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁,产生光谱的变化,结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量。近红外光谱法具有高效、无污染、无破坏性以及可同时多组分等特点。
4. 气相色谱法氨基酸:将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质,根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同,实现对氨基酸的定量分析。GC法不仅能氨基酸含量,还可以发现新氨基酸,但缺点在于操作复杂、干扰因素多,专一性差。
5. 高效液相色谱法氨基酸:是常用的一种氨基酸方法。由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应,因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质,衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。
1) 柱前衍生:是样品在进入色谱柱之前,氨基酸经衍生化转变为适合反相高效液相色谱的物质,常用的衍生剂有丹酰氯、邻苯二甲醛、萘二甲醛等。实验常用的色谱柱有C8柱、C18柱和CN柱,方法有HPLC-UV、HPLC-ELSD、HPLC-FLD、HPLC-MS等。
2) 柱后衍生:是样品经离子交换柱分离,分离后的氨基酸再进行衍生化处理。常用的柱后衍生化试剂有茚三酮和荧光胺,其中荧光胺的灵敏度比茚三酮高大约3个数量级。柱后衍生主要用于食品、蛋白质水解液、生理体液等样品中氨基酸含量的。